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芽孢杆菌属_图

归档日期:06-24       文本归类:纤毛虫      文章编辑:爱尚语录

  芽孢杆菌属_物理_自然科学_专业资料。第二十二章 芽胞杆菌属 芽胞杆菌属(Bacillus)200多个种,致病的的5个种 炭疽芽胞杆菌(B.anthracis) 蜡样芽胞杆菌(B.cereus) 蕈状芽胞杆菌(B.mycoides) 巨大

  第二十二章 芽胞杆菌属 芽胞杆菌属(Bacillus)200多个种,致病的的5个种 炭疽芽胞杆菌(B.anthracis) 蜡样芽胞杆菌(B.cereus) 蕈状芽胞杆菌(B.mycoides) 巨大芽胞杆菌(aterium) 苏云金芽胞杆菌(B.thuringiensis) 1 一、炭疽芽胞杆菌 (Bacillus anthracis,B.anthraci ) 炭疽是人畜共患的急性传染病 主要是牛、羊等食草类动物的传染病,人可 通过接触或摄食病畜及畜产品而感染 皮肤炭疽、肠炭疽、肺炭疽等, 并发败血症,甚至炭疽性脑膜炎 2 生物学性状 ? 形态染色: 致病菌中最大的G+杆菌, 两端平切、竹节状 有毒株可有明显荚膜 炭疽芽胞杆菌 亚甲基蓝染色 ×1000 革兰染色 ×1000 3 芽胞——椭圆形,小于菌体,位于菌体中央 ? 多在有氧条件下形成,25~30℃,在培养基 中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中, 都易形成芽胞 ? 在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞,尸 体严禁解剖 ? 4 培养特性: ?需氧或兼性厌氧,生长条件不严格,最适温 度30~35℃ ?普通培养基—扁平、粗糙、不透明、灰白色、 无光泽,边缘不整齐的菌落,低倍镜下菌落边 缘呈卷发状 5 ? ? BAP:12~15h不溶血,18~24h轻微溶血 其他需氧芽胞杆菌大多溶血明显而快速 炭疽杆菌在血琼脂平板中菌落 6 肉汤—絮状沉淀生长 ? 明胶—37℃18~24h表面液化成漏斗状,由于 细菌沿穿刺线向四周扩散形成倒松树状。 ? NaHCO3BAP: --有毒株—5%CO2、37℃24~48h、产生荚膜 呈黏液型菌落,挑取时呈粘丝状(鉴别要点) --无毒株—粗糙型菌落 ? 7 生化反应: 分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、蕈糖, ? 有些菌能迟缓发酵甘油和水杨素产酸不产气 ? 水解淀粉、还原硝酸盐 ? 不产生吲哚和硫化氢、不利用柠檬酸盐、不 分解尿素 ? 在牛乳中生长2~4天牛乳凝固→缓慢胨化 ? 触酶(+)、卵磷脂酶弱(+) ? 8 抗原构造: ? 菌体多糖抗原: --与毒力无关,耐热、耐腐败,长时间煮沸仍 能与特异性抗体发生环状沉淀反应(Ascoli热 沉淀反应)。 --特异性不高,能与其他需氧芽胞杆菌、14型 肺炎链球菌、人A血型抗原发生交叉反应。 9 ?荚膜多肽抗原: --与毒力有关,有抗吞噬作用,有利于细 菌生长和扩散 --荚膜肿胀试验,对本菌鉴定有意义 ?芽胞抗原: 有免疫原性和血清学诊断价值 10 ? 炭疽毒素: --保护性抗原(PA)、致死因子(LF)、水肿 因子(EF)三个组分 --单独皆无致病性,与PA结合才显示出致病性 --具有抗吞噬和免疫原性 11 抵抗力: --芽胞抵抗力很强,煮沸10min或干热140℃ 3h才能杀灭 --在干燥土壤中或皮毛中常温下存活数十年致 病力不减,牧场一旦污染,传染性可持续数 十年 --生物武器 12 --芽胞对化学消毒剂抵抗力不一,对碘和氧化 剂较敏感,常用以下方法杀菌: 1:2500碘 10min、 3%H2O2 1h、 4%高锰酸钾 15min、 0.5%过氧乙酸 10min --对磺胺、青霉素、链霉素、四环素、红霉素、 氯酶素均敏感 13 临床意义 炭疽是人畜共患的急性传染病 主要是牛、羊等食草类动物的传染病,人可 通过接触或摄食病畜及畜产品而感染 皮肤炭疽、肠炭疽、肺炭疽等, 并发败血症,甚至炭疽性脑膜炎 14 致病物质 ? 荚膜: ? 抗吞噬,有利于细菌在组织内繁殖扩散 ? 炭疽毒素: ? 保护性抗原、致死因子、水肿因子 15 所致疾病 ? 炭疽病: ? 传染源:患病食草动物及其制 品或被污染物 ? 传播途径:接触——皮肤炭疽 食用——肠炭疽 吸入——肺炭疽 ? 可并发败血症,死亡率极高 16 17 ?乙类传染病 ?发生肺炭疽按甲类处理 病后可获得持久免疫力 18 三、微生物学检验 ? 要求快速检出、分离鉴定病原菌,以利早 期确诊、查清疫源、及时治疗和采取预防 对策 19 标本的采集与处理 皮肤炭疽:病灶深部标本 ? 肺炭疽:痰和血液 ? 肠炭疽:粪、呕吐物 ? 脑膜炭疽:CSF、血液 ? 死于败血症的动物,严禁宰杀和解剖,可消 毒皮肤后割取耳朵、舌尖采集少量血液,局 限性病灶可取病变组织或附近淋巴结。 ? 20 ?无杂菌污染标本:直接接种肉汤增菌或固体培养基 ?污染杂菌固体标本:加10倍量生理盐水充分浸泡,振 荡10~15min 、静置10min,取悬液65℃水浴30min或 85℃5min杀死杂菌,保留芽胞活性,再增菌和培养 ?污染杂菌液体标本:离心 ,弃上清液后,加0.5%洗涤 剂振荡10~15min ,离心取沉淀物增菌和分离培养 21 检验程序 皮毛、腐败脏器等 血液 Ascoli试验 以NG制成悬液 经加温或饱和 尿素处理 BAP或戊 烷脒平板 肉汤增 菌培养 2%兔血清肉汤4-8h 动 力 观 察 生 化 反 应 串 珠 试 验 噬 菌 体 裂 解 荚 膜 肿 胀 试 验 G染色镜检 青 霉 素 抑 制 菌落特征 毒 力 试 验 确定报告 22 痰、呕吐物、CSF及 炎症分泌物 2%兔血清肉 汤快速增菌 37℃4h 荚膜肿胀试验 直接涂片 荚膜染色 G染色 0.2ml注射小白鼠 腹腔,8h后解剖 涂片G染色、 荚膜染色 初步报告 初步报告 23 涂片染色: --G染色、荚膜染色、芽胞染色—初步报告 --荚膜荧光抗体染色 ? 核酸检测:核酸杂交 ? 分离培养: --BAP、戊烷脒多粘菌素B平板 --2%兔血清肉汤增菌→分离培养 ? 24 鉴定试验: 形态和菌落特征 ? 生化试验:表11-1 ? 串珠试验: --接种于含青霉素(0.05~0.5U/ml)的肉汤 中,37℃ 6h,大而均匀成串的圆球状菌体 --与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关 --类炭疽无此现象 ? 25 ?青霉素抑制试验: 接种于含青霉素5、10、100U/ml琼脂平板, 37℃24h 生长 受抑制不生长 ?串珠和青霉素抑制联合试验: 青霉素纸片 抑菌环 兔血琼脂平板 26 ? 噬菌体裂解试验:AP631炭疽噬菌体 ? NaHCO3毒力试验: 接种于含0.5%NaHCO3和10%马血清的平板, 10%CO2、37℃、24~48h 有毒株形成荚膜—黏液型菌落 无毒株不形成荚膜—粗糙型菌落 ? 动物试验: 小鼠、家兔或豚鼠皮下接种 27 ?植物凝集素试验: ?Ascoli热沉淀试验:可作追溯性诊断 28 Plaque 29 二、 蜡样芽胞杆菌 (Bacillus cereus, B. cereus ) 30 微生物特性 ? 形态与染色: - G+大杆菌 -生长6h后即形成圆形芽胞、位于 菌体中心或次末端、不突出菌体 -菌体两端平截,多数呈链状排列 -引起食物中毒的菌株多有周鞭 毛、无荚膜 31 ?培养特性: ?需氧或兼性厌氧 ?营养要求不高 ?最适温度30~35℃ ?普通琼脂平板:菌落较大, 灰白色,表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状,有 蜡样光泽 32 ? BAP —有β溶血 卵黄平板—生长迅速,培养3h后,虽看不 到菌落,但该菌可分解卵磷脂而形成白色 的混浊环,称乳光反应或卵黄反应 33 ?生化反应: ?能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、水杨素、糊 精,产酸不产气 ?能胨化牛乳,液化明胶,VP(+)、卵磷脂 酶(+) ? 多次传代后生化特性常可改变 34 ?抵抗力: 耐热,肉汤中细菌需100℃20min才能杀死, 食物中毒菌株的游离芽胞耐受100℃30min、 干热120℃60min才能杀死 对氯霉素、红霉素、庆大霉素敏感,对青霉 素、磺胺、呋喃类耐药 35 临床意义 ?食物中毒 含菌量达105/g以上 呕吐型——耐热肠毒素 腹泻型——不耐热肠毒素 ?全眼球炎(外伤后) ?心内膜炎、败血症和脑膜炎 36 ? ? 夏、秋季多见 食物有米饭、乳品、禽畜肉类、果汁饮 料等,大多为加热烹调过的熟食 在米饭中极易繁殖,由米饭受污染引起 的食物中毒在国内、外均为常见 中毒食物大多无腐败、变质现象,感官 性状正常,应引起注意 ? ? 37 微生物学检验 ? 标本采集: 可疑食物、粪便、呕吐物,因食品暴露 于空气中,在一定程度都会受到本菌污染, 所以不能分离出该菌就认为是引起食物中 毒的病原菌。 38 确诊由该菌引起的食物中毒必须: ? ? 从食物中分离出菌数≥105CFU/g,提示本菌活 跃生长,构成潜在危险 从可疑食物分离到的菌株与从病人粪便和(或) 呕吐物中分离到的菌株属同一血清型 39 检验程序 呕吐物、残留食物等 活菌计数 接种 普通琼脂平板、 BAP 、卵黄平板 37℃18-24h 纯培养 直接涂片染色镜检 动物试验(肠 毒素测定) 生化反应 血清凝集(分型) 报告结果 40 ?检验方法: ?直接镜检 ?分离培养与活菌计数 普通琼脂平板、BAP、卵黄平板 ?鉴定与分型: 根据菌落特点、形态染色、生化反应等初步鉴定 生化分型、血清分型、噬菌体分型,肠毒素检测 41 第五节 棒状杆菌属 42 棒状杆菌属概述 棒状杆菌属是一群革兰染色阳性杆菌,菌体形态 特征是在其一端或两端常呈棒状膨大,故名,归属 放线 棒状杆菌属种类繁多, 主要有: 白喉棒状杆菌(C.diphtheriae) 假白喉棒状杆菌(C.pseudodiphtheriticum) 干燥棒状杆菌(C.xerosis) 化脓棒状杆菌(C.pyogenes) 溃疡棒状杆菌(C.ulcerans) 假结核棒状杆菌(C.pseudotuberculosis) 溶血棒状杆菌(C.haemolyticum) J-K群棒状杆菌(C.jeikeium-CDC group JK) 44 ?G+杆菌、一端或两端膨大成棒状 ?染色不均匀,两端浓染或有异染颗粒 ?无鞭毛、无芽胞 ?排列不规则,呈栅栏状 ?白喉棒状杆菌——致病菌 ?类白喉棒状杆菌——条件致病菌 45 白喉棒状杆菌 C.diphtheriae 46 一、生物学特性 ? 形态与染色: G +细长微弯的杆菌 一端或两端膨大呈棒状 白喉棒状杆菌异染颗粒 常排列呈V、L、X等文字形 异染颗粒——形态上的鉴别特征 无荚膜、无芽胞、无鞭毛 1000× 47 ?培养特性: ? ? 需氧或兼性厌氧,最适温度35~37℃ 营养要求高,在含血液、血清、鸡蛋的培养基上生 长良好 吕氏(Loeffler)血清斜面或鸡蛋斜面: 生长最快,6h即生长,10~12h长出灰白色、 湿润、有光泽的光滑型菌苔/菌落,菌体形 态典型、异染颗粒明显,连续传代可保持形 态和产毒性能不变 48 ? ?BAP: ?菌落灰白色、光滑型、 直径1~2mm、有狭窄 β溶血环(轻型) ?多次传代后菌体变为球 型 BAP中菌落 49 ?亚碲酸钾BAP:选择鉴别培养基 ?黑色菌落——鉴别依据 ?不同菌型还原能力不同,呈现黑色或灰黑色 菌落 ?根据菌落特征及生化反应特点可将本菌分为: 重型、中间型、轻型 白喉棒状杆菌 在亚碲酸钾BAP中菌落 50 ?液体培养基: 生长较好,但菌型不同其生长特点也不相同 51 ?生化反应: ? 分解葡萄糖、半乳糖、麦芽糖、果糖产酸 不产气,不分解乳糖、甘露糖,一般不分 解蔗糖,吲哚 (-)、硝酸盐还原(+)、 触酶(+)、氧化酶(-)、明胶液化(-) 尿素(-) 重型能分解淀粉、糖原、糊精,迟缓分解 蔗糖 ? 52 ?抵抗力: ? ? ? 对干燥、寒冷和日光抵抗力较其他无 芽胞细菌强,在干燥的假膜中可生存3 个月 对湿热和消毒剂敏感,5%石炭酸、1: 1000升汞1min,100℃1min、60℃10min 均可灭菌 对青霉素、红霉素等敏感,对磺胺不 敏感 53 二、临床意义 ? 致病物质 (一)白喉外毒素 ? ? ? 毒力强,130ng/kg可使人死亡 抗原性强 编码外毒素的tox基因——β-棒状杆菌噬 菌体 54 ? 作用机制: A亚单位可使细胞延伸 因子-2(EF-2)灭活, 影响蛋白质的合成 作用特点: 毒性作用大,1分子能 杀一个细胞 作用于多种细胞,心肌、 神经细胞均有毒素受体 肿瘤细胞对此毒素敏感 ? ? ? ? 55 (二)索状因子 细菌表面的一种糖脂,能破坏细胞的线 粒体,影响细胞的呼吸与磷酸化 (三)K抗原 --细胞壁外面的一种不耐热糖蛋白 --抗吞噬 --有利于细菌在黏膜表面的定植 56 所致疾病:白喉--急性呼吸道传染病 ? ? ? 传染源:患者及带菌者 传播途径:飞沫或污染 临床表现 ? 细菌------上呼吸道粘膜, 生长繁殖,产生毒素 细菌与毒素共同作用引起局部炎症: ? 炎性渗出,坏死,纤维蛋白 →→假膜→→窒息 ? 毒素→→血液→→全身中毒症状 外周N---N炎:膈肌麻痹---呼吸困难 声带麻痹---声音嘶哑 软颌麻痹---吞咽困难 ? 心肌---心肌炎 ? 57 白喉假膜 58 免疫性: ?抗毒素免疫 ?感染后机体可获得牢固的免疫力 ?机体还可通过其它方式获得免疫力: 六月以下婴儿---------母亲 ? 成人---------------------隐性感染、人工主动免疫 ? ?易感者: 1~5岁儿童 ? 成人---也有可能 ? 59 锡克试验(Schick test) (白喉外毒素皮内试验) ? 调查人群在感染或预防接种后对白喉是否 产生免疫力 根据外毒素与抗毒素中和的原理,以少量 白喉外毒素测定机体有无相应抗毒素 缺点—观察时间长、操作繁琐,不易进行 广泛测试 60 ? ? 锡克试验 ? ? 白喉杆菌所含的毒素对机体组织有损伤作用,而引起 一系列病理变化。对白喉具有免疫力的个体,血清中有白 喉抗毒素,能中和白喉毒素的有害作用。皮内注射白喉毒 素后,观察局部皮肤反应,可以判断受试者是否对白喉有 免疫力。 于前臂屈侧皮肤乙醇消毒,皮内注射白喉毒素,0.1ml, 另一侧前臂皮内注射等量对照液(经加热80℃,5min处理过 的白喉毒素)。24h~48h后观察结果。 1.出现下列情况之 一为阳性。(1)试验臂局部皮肤红肿,第4日直径可达 10mm-20mm,7d-14d开始消退,对照臂无反应。(2)于 注射后6h-12h,两臂同时出现同样大小的红斑,颜色较浅, 24h后对照臂红斑开始消退,而试验臂的皮肤反应继续发 展。2.阴性:两臂注射部位均无反应。3.假阳性:双臂 注射部位6h-12h后同时出现同样大小的红斑,颜色较浅, 24h后均开始消退。 61 ? 主要用于检查人群对白喉的免疫状态,也可指导临床 治疗。1.阳性:表示机体对白喉无免疫力,应进行白喉 疫苗接种,然后再用本试验测定免疫效果。2.阴性:表 示机体已产生了免疫力。3.假阳性:也表示机体对白喉 具有免疫力。双臂注射部位均出现红斑,属于机体对白喉 毒紊蛋白质的变态反应。4.对于临床疑诊的白喉患者,可 同时做本试验与咽拭子细菌培养,根据两种试验结果,分 别给予不同的处理。(1)白喉杆菌培养阳性,本试验阴 性,按白喉病例处理。(2)白喉杆菌培养与本试验均阴 性,应留观察。(3)培养阴性,本试验阳性,应进行预 防接种。 疑诊白喉,人群白喉免疫状态筛查。 局部皮肤 感染者。 同狄克试验。 62 ? ? ? 致敏红细胞凝集试验 测定血清中抗毒素水平 0.1ml血清,倍比稀释+外毒素致敏红细胞 37℃、1h 敏感度可达10-4单位,简便快速 63 ?防治原则: --人工主动免疫——白喉类毒素 DPT混合疫苗:白喉类毒素、百日咳菌苗、破伤风 类毒素 --人工被动免疫——白喉抗毒素+白喉类毒素 --治疗:抗毒素+抗生素 早期足量注射白喉抗毒素,使毒素在与细胞 结合以前被抗毒素中和 64 三、微生物学检验 ? ? 分离出白喉杆菌,并证明其毒力 标本采集: 分泌物 取双份 如不能及时检验,标本浸于无菌生理盐水或 15%甘油生理盐水保存 65 检验程 序 直接涂片 染色镜检 (单染或 G 染色+ 异染颗粒 染色) 患者或带菌者咽喉、鼻咽拭子等 吕氏血清斜 面35℃12~ 18h 涂片染色 镜检(G染 色和异染 颗粒染色) 亚碲酸钾BAP、 BAP35℃ 16-18h 35℃24~48h 观察菌落 特点 吕氏血清斜面 涂片染色 镜检 生化反应 毒力试验 66 直接涂片染色镜检: -- 2~3张涂片→G染色、异染颗粒染色 镜检——初报“直接涂片检出形似白喉 杆菌”——早期诊断 --用无菌棉拭子浸以动物血清,采集标本, 37℃10h,涂片染色镜检——提高阳性率 ? 67 ?分离培养: 吕氏血清斜面: 37℃、8~12h →→涂片染色镜检 --检出率要比直接涂片高,有助于快速诊断 ? 亚碲酸钾BAP: 37℃、24~48h,黑色菌落 ? BAP: ? 轻型有β溶血环,应注意与溶血性链球菌鉴别 68 ?鉴定: ? ? 形态染色、菌落特点、生化反应 糖发酵试验、尿素酶、硝酸盐还原 —鉴别棒状杆菌属不同的种 白喉:葡萄糖 (+)、麦芽糖 (+) 蔗糖 (-) 69 ?毒力试验(鉴定致病菌株的重要依据) 体外法: 琼脂平板毒力试验(Elek平板毒力测定) SPA协同凝集试验 对流电泳 ? 对流免疫电泳 琼脂平板毒力试验-Elek平板 70 ?体内法 : 用豚鼠作毒素-抗毒素中和试验 71

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