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不同月龄荷斯坦犊牛瘤胃纤毛虫计数及形态观察pdf

归档日期:07-12       文本归类:纤毛虫      文章编辑:爱尚语录

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  反刍动物营养 ≤ 不同月龄荷斯坦犊牛瘸胃纤善虫 。黪。 计数及黪态观察 系方天含 真正的反刍动物营养专家 刘景喜1 韩静1 潘振亮1 陈龙宾’ 袁思垄2 周娟2张煊明2于化福2李怀安2 北京东方夭台生物技术有限责任公司协办 1.天津市畜牧兽医研究所 电线.天津嘉立荷牧业有限公司 摘要 为了解不同月龄荷斯坦犊牛瘤胃纤毛虫数量和形态,试验采集4和6月龄荷斯坦犊牛瘤胃液, 单叶原始虫、简单内毛虫、菱形内毛虫、囊袋内毛虫和牛内毛虫5种形态的纤毛虫。说明6月龄的犊牛纤毛 虫数量已接近成年母牛水平。 关键词犊牛瘤胃纤毛虫 计数形态 中图分类号:S823 文献标志码:A 反刍动物瘤胃内栖息着大量微生物,主要包括 素分解细菌和厌氧真菌数量变化特点。瘤胃纤毛虫 细菌、原虫和真菌,它们对饲料在瘤胃中的降解、 的形态结构,与自由生活的纤毛虫基本相似,其体 合成和利用起着重要作用。其中纤毛虫调控作为瘤 型经常保持比较稳定不变的状态,一般近似卵圆、 胃调控的重要方面,对改善各种营养物质的代谢, 椭圆和侧扁椭圆形等。虫体的大小(或体长)通常 维持瘤胃内环境的稳定有重要作用。 介于20~200斗m。纤毛虫的基本构造包括表膜、纤 瘤胃是反刍动物在适应自然环境进化过程中形 毛、动胞器、前庭和胞口、外质和内质、伸缩炮及 成的复杂生态系统,纤毛虫数量和种群分布受多种 细胞核等(冯仰廉,2006)。国内关于荷斯坦犊牛 条件影响,如:品种、个体、年龄、日粮类型、生 瘤胃液中纤毛虫种类及数量的报道较少,而犊牛是 理状况和环境条件等因素。纤毛虫在改善各种营养 从非反刍动物到反刍动物的过渡阶段,是建立瘤胃 物质消化代谢、维持细菌必需的厌氧环境及降低硝 微生物菌群的关键阶段,研究探讨了犊牛阶段瘤胃 酸盐和亚硝酸盐的致毒作用等方面具有不可替代的 纤毛虫的数量和种类,对研究瘤胃微生物区系的建 作用。我国关于奶牛瘤胃中纤毛虫数量的研究较 立具有指导意义。 少,在张文龙(1987)等的研究中,对100头成年 1材料与方法 黄牛进行了瘤胃液纤毛虫计数,发现每毫升健康黄 1.1材料 牛瘤胃液纤毛虫数为(30.124±8.34)万个。在额 1.1.1试验动物 尔很巴雅尔(1994)的研究中,成年牛瘤胃中获得 于天津市嘉立荷牧业有限公司第七奶牛场,随 了16属74种纤毛虫,每毫升瘤胃液中纤毛虫平均机抽取4和6月龄各lO头犊牛,各采集3个瘤胃液 数量为32万个。田发益等(2010)研究了西藏黄 样品。 牛瘤胃液中12种不同属的纤毛虫及4个主要纤维 1.1.2试验仪器 瘤胃液采样器;重庆奥特光学仪器有限公司生 收稿刚胡:2012一ll一20 产的BK—LED型生物显微镜;血细胞计数板;大 基金项¨:天津市科技支撑计划重点项J(10ZCKFNC01500) 口滴管;25mL试管;250mL灭菌具塞三角瓶。 38 lt瞄£AR(.t}1NO 饲料研究FEED 20n}3 万方数据 反刍动物营养 1.1.3}f1荜绿染色液(MFS) 从表l叮见:4 Jj龄的犊牛瘤胃纤毛虫数为 将8g氯化钠、0.6gJtt罐绿和100mL甲醛溶 (16.86±8.93)万个/mL,6Jj龄犊牛瘤胃的纤毛 000mL 液混合定容至l l!J】r。 1.2犊牛饲养管理 ‘差异,但是6月龄犊牛瘤胃纤毛虫数比4月龄高 犊牛采用早期断奶【fL期补料的方式培育,7口 39.98%。 龄,{:始补饲开食颗粒料,42日龄断奶,饲喂颗粒料 2.2纤毛虫形态观察 至5月龄,然后过渡到全混合H粮。 试验通过BK—LED型,卜物显微镜对犊牛瘤胃 1.3方法 纤毛虫进行基本形态观察,并捕捉1广其中具有典型 1.3.1瘤胃液采集 形态的瘤胃纤毛虫,分别观察到图l~图5的5种 于f{I午饲喂后2h使朋孥用瘤胃液采样器采集 形态纤毛虫。 瘤胃液,收集于250mL锥形瓶rf,,试即进行前处理。 图l中纤毛虫虫体似长椭网形,大核呈杆状而 1.3.2瘤胃液处理 较长,在它的左侧巾部稍后,fr一凹丽窝,小核即紧 将采集的瘤胃液用4层纱前i过滤,取lmL滤 靠在陷窝处,大核的长度是体长的1/2,体后端右 液放置于试管中,每个瘤胃液样品3个重复,用 面有一明显而肥厚的簟叶突起,这种瘤胃纤毛虫符 MFS液做20倍稀释,染色,静置30min。 合内毛目双毛哑科原始纤毛属的译叶原始虫的典型 1.3.3纤毛虫计数 形态 将试管反复倒转10次,立即用吸管(L】径 l mm)吸取稀释液冲入血细胞计数板的计数室,盖 f:盖玻片,静置3rain,在光学旺微镜(100倍)下 计数。样品计数时,每个样品计数10个大方格, I:下各5个大方格,即4角4个大方格和中央1个大 方格,其中4角每个大方格包含16个中方格,中央 1个大方格包括25个小方格(町以折算成16个中方 格,因为16个中方格的体积等于25个小方格的体 积),最后取平均数。按下列公式计算纤毛虫数。 ^, xD×l000 每毫升纤毛虫数2而专而×16×10 图1单叶原始虫 =N×D×l000 图2中纤毛虫的虫体擘扁圆形,前端平直,后 N:所有方格中纤毛虫的总数;D:稀释倍数; 端较网,大核呈杆状,前端较粗,向后逐渐变细, 16:每个大方格中有16个中方格;10:共计数10 其长度为体长1/3。这种瘤胃纤毛虫符合内毛目头 000:1 mm3换算为l 个大方格;l mL时的倍数。 毛科内毛亚科的简单内毛虫的典型形态. 1.4纤毛虫形态观察 在10×40倍显微下对纤毛虫进行形态观察, 并进行显微照相。 2结果与分析 2.1纤毛虫计数结果 表1 4和6月龄犊牛瘤胃纤毛虫计数结果 Y个/mL 项ll 纤毛虫数ll} 4J J龄 16.86±893“ 6JJ龄 23.60±12.68“ }}:州列数据肩钿i小¨小1i’,坶农,J÷座钟礁并,片j标相Jl司小。i’,母 丧爪篾片4i妊并。 图2简单内毛虫 饲料研究 ¨_{)Rl,sh^烈1lIN(,3一:(J¨39 万方数据 反刍动物营养 阁3中纤毛虫体形略似菱形,体后端有一圆滑 3讨论 的叶状突起,符合内毛I头毛科内毛亚科的菱形内 3.1纤毛虫的数量 毛虫的典删形态。 犊牛出生后,只有接触固体饲料瘤胃才开始发 育,当犊牛采食固体饲料时,细菌、原虫和真菌开 始在瘤胃中建立起来,这些微生物是瘤胃内的正常 菌群。几百种微生物经采食和饮水进入瘤胃并附着 在饲料颗粒上,然而能在瘤胃中占主导地位的微生 物只有几十种。研究瘤胃纤毛虫的数量和种群分 布,为研究犊牛瘤胃内环境建立及犊牛瘤胃发育提 供科学依据。对合理应用饲料和开辟新的饲料资源 具有重要意义。 张文龙等(1987)为了使较大纤毛虫顺利进入 图3菱形内毛虫 mm厚的环 计数室,在血细胞计数室2侧贴上0.9 矧4中纤毛虫体形近卵圆形,大核呈长杆状, 氧树脂玻片,使计数室厚度达到lmm。施学仕等 其长度为体长的3/4。这种纤毛虫符合内毛目头毛 (1983)将普通血细胞计数板与特制纤毛虫计数板 科内毛、I矿科的囊袋内毛虫的典型形态。 作对比,结果表明:普通血细胞计数板与特制纤毛 虫计傲板的计数结果间无显著差异。试验使用普通 血细胞计数板,显微镜下观察到的纤毛虫多为内毛 亚科、双毛亚科和头毛亚科,体型较小,大都短于 100斗m,可能是由于血细胞计数板的深度不够,使 较大纤毛虫难以进入,可能也会导致纤毛虫计数的 结果偏小。 目前国内对荷斯坦犊牛瘤胃纤毛虫的报道较 少,张文龙等(1987)测定健康黄牛瘤胃液纤毛虫 l 图4囊袋内毛虫 调查了西林水牛和摩拉水牛,其瘤胃纤毛虫数为 矧5,l,纤毛虫虫体!,!扁圆形,大核呈短杆状, 其K度足体长的1/3,瀚庭腔向大核方向弯曲,这 验饲喂方式和饲养管理条件下,测定4月龄的犊牛 种纤毛虫符合内毛目头毛科内毛亚科的牛内毛虫的 典型形态。 月龄犊牛瘤胃内环境尚不成熟,但正在趋于完善; ● 个/mL,可见6月龄的犊牛内环境建立已经较完善。 说明犊牛4—6月龄是瘤胃发育的关键阶段,在这 个时间段的犊牛瘤胃微生物正在生存和繁殖,瘤胃 微生物区系正在建立当中,随着犊牛的生长和发育 口 及全混合日粮的饲喂,6月龄犊牛瘤胃内纤毛虫数 已超过20万个/mL,接近成母牛水平。 3.2纤毛虫形态 田发益等(2010)对10头西藏农区黄牛瘤胃 液中纤毛虫种类和24h内数量变化特征进行统计, 图5牛内毛虫 共发现了12个不同属的纤毛虫,并对其中常见纤 40饲料研究 万方数据 反刍动物营养 毛虫采取r影像。试验采取_r部分具有典型形态的 及纤毛虫数量和质量正常值的测定.畜牧与兽医, 纤毛虫显微影像,未对犊牛瘤胃液中的纤毛虫类型 1987(1):26—27. 、 做系统分类,在固定染色过程中,小部分纤毛虫的 [2]额尔很巴雅尔.牛羊瘤胃纤毛虫的初步调查.畜牧 大核已将近崩解,就试验的条件来说难以将所观察 兽医杂志,1994(1):30—35. 到的纤毛虫系统分类。 [3]田发益,李晓忠,巴平,等.西藏农区黄牛主要瘤胃 犊牛之所以能够有效地消化粗饲料主要是依靠 微生物及瘤胃液物质特征值.中国兽医学报, 瘤胃微生物的作用,瘤胃微生物对例料的发酵是导 2010,30(9):1239—1244. 致反刍动物与非反刍动物消化代谢特点不同的根本 [4]施学仕,韩正康.瘤胃纤毛虫的计数和分类.畜牧 原因(冯仰廉2006)。犊牛瘤胃纤毛虫的数量和种 与兽医,1983(3):29—33. 类是犊牛瘤胃微生物区系的重要部分,是犊牛瘤胃 [5]桂荣,赵青余,那日苏,等.中国水牛瘤胃纤毛虫分 发育完善与否的重要指标,目前关于犊牛瘤胃内环 布与挥发性脂肪酸的研究.畜牧兽医学报,2005, 境发育的报道较少,试验为研究犊牛瘤胃发育提供 36(12).1286一1291. 理论依据。 通信地址:天津市西青区华苑产业园区发展六 参考文献 道6号海泰绿色产业基地K1—4— [1]张文龙,徐作良,牛庆恕,等.健康黄牛瘤胃液pH 502300384 +“+一+一+”+n+一+一+一+”+一+一+-+-+-+一+-+一+”+-+一4--+-+一·+_一+一+一+一+ (上接第18页) 103—1108. 利用肝糖原和肌糖原分解功能,血糖质量浓度迅速 响.天然产物研究与开发,2010(22):1 升高,研究中LPS刺激和ASPS对Glu的影响并不[5]张旭东,马杰,张彬.刺五加的药理作用研究概况. 显著,有报道显示仔猪血清Glu含量显著低于断奶 河北中医药学报,2007,22(3):45—46. 前,与应激使血糖升高相反;可能是由于仔猪消化 [6]刘合军,孔祥峰,尹富贵,等.刺五加提取物对早期 能力下降,Glu供应不足,机体通过动员脂肪来调 断奶仔猪生长性能和血清生化参数的影响。天然 节,因此造成14d时,FFA含量的显著提高。 产物研究与开发,2006(18):993—998. 综上所述,ASPS口J.以通过调节机体免疫功能[7]魏凤仙,陈亮,胡骁飞,等.刺五加提取物在饲料中的 租ml液指标等途径,影响消化代谢功能,提高ADFI, 应用研究进展.河南农业科学,2010(9):138—140. 促进断奶仔猪的抗免疫应激能力。 [8]尹富贵,印遇龙,孔祥峰,等.刺五加提取物对早期 断奶仔猪肠道微生物多态,}生的影响.天然产物的 参考文献 研究与开发,2007(19):545—549. [1]罗洪明,陈代文.不同日粮蛋白水平对早期断奶仔 [9]_-Y-艳萍,祁克宗,涂健,等.内毒素对仔鸡血浆SOD 猪的生长性能和生化指标的影响.饲料研究,2005 活性及MDA水平的影响.动物医学进展,2006 (8):3—8. (27):63—65. [2]佟丽,李吉来.刺五加多糖研究进展.天然产物研 [10]吴金节,龙彩虹,张德群,等.早期断奶应激对仔 究与开发,1997,11(1):87—91. 猪血清生化指标的影响.中国兽医学报,2000,20 [3]袁学千,王淑梅,高权国.刺五加多糖增强小鼠免疫 (3):261—263. 功能的试验研究.中医药学报,2004,32(4):48—49. [4]周锡红,吴信,燕富永,等.菊粉和刺五加提取物对 通信地址:辽宁省沈阳市沈河区东陵路120号沈 早期断奶仔猪生长性能、血液指标和肠道形态的影 阳农业大学畜牧兽医学院110866 饲料研究 万方数据 不同月龄荷斯坦犊牛瘤胃纤毛虫计数及形态观察 作者: 刘景喜, 韩静, 潘振亮, 陈龙宾, 袁思堃, 周娟, 张煊明, 于化福, 李怀安 作者单位: 刘景喜,韩静,潘振亮,陈龙宾(天津市畜牧兽医研究所), 袁思堃,周娟,张煊明,于化福,李怀安(天津嘉立荷 牧业有限公司) 刊名: 饲料研究 英文刊名: Feed Research 年,卷(期): 2013(2) 参考文献(5条) 1.张文龙;徐作良;牛庆恕 健康黄牛瘤胃液pH及纤毛虫数量和质量正常值的测定 1987(01) 2.额尔很巴雅尔 牛羊瘤胃纤毛虫的初步调查 1994(01) 3.田发益;李晓忠;巴平 西藏农区黄牛主要瘤胃微生物及瘤胃液物质特征值[期刊论文]-中国兽医学报 2010(09) 4.施学仕;韩正康 瘤胃纤毛虫的计数和分类 1983(03) 5.桂荣;赵青余;那日苏 中国水牛瘤胃纤毛虫分布与挥发性脂肪酸的研究[期刊论文]-畜牧兽医学报 2005(12) 引用本文格式:刘景喜.韩静.潘振亮.陈龙宾.袁思堃.周娟.张煊明.于化福.李怀安 不同月龄荷斯坦犊牛瘤胃纤毛虫计数及形态观察 [期刊论文]-饲料研究 2013(2)

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